结肠癌中相关miRNA对NRP2调控的预测及鉴定
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【作 者】:
【摘 要】目的:预测可能调控神经纤毛蛋白2(neuropilin-2,NRP2)的微小RNA(microRNA,miRNA),鉴定其对NRP2的调控作用及可能的调控机制.方法:使用生物信息学软件预测可能调控NRP2的miRNA。选择可能性最大的miRNA-486—5p进一步研究,构建miRNA-486-5p过表达质粒,采用脂质体法将质粒转染入人结肠癌细胞株SW620,实时定量PCR(qRT-PCR)验主miRNA-486—5p的表达丰度,Westernblot检测NRP2的表达,双荧光素酶实验验证miRNA486-5p对NRP2的调控机制.结果:生物信息学技术预测共有25条miRNA可能调控NRP2的表达,结合文献选择miR.486.5p进一步研究;miR-486-5p过表达质粒转染SW620细胞后,表达丰度升高,NRP2蛋白表达明显下调,双荧光素酶实验证实miRNA-486-5p可与NRP2IllRNA3’非转录区(3’untranslated region,3’UTR)直接结合,从而发挥对NRP2转录后翻译的抑制作用.结论:miRNA-486—5p可调控的NRP2的表达,其作用机制是通过结合NRP2 3’UTR而抑制NRP2mRNA的正常翻译.
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