靶向胰腺癌PANC-1细胞整合素连接激酶基因RNA干扰质粒的构建及鉴定
【出 处】:
【作 者】:
【摘 要】目的:构建整合素连接激酶(integrin-linkedkinase,ILK)基NRNA干扰(RNAinterference,RNAi)重组质粒并检测其对胰腺癌PANC-1细胞ILK基因表达的干扰效率,为进-步研究胰腺癌中ILK基因功能奠定实验基础和理论依据.方法:设计并构建3条含有针对ILK基因的小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA)序列的重组质粒并进行DNA测序.通过阳离子脂质体Lipofectamine2000将重组质粒转入人胰腺癌细胞株Panc-1细胞中,G418压力筛选至得到稳定转染细胞克隆,利用Real-TimePCR和Westernblot检测ILK基因的表达抑制情况.筛选出干扰效率最高的重组质粒.结果:经DNA测序证实胰腺癌PANC-1细胞ILK基因的RNA干扰重组质粒构建成功;重组质粒稳定转染Pant-1细胞后f各组转染效率均〉90%),各实验组ILK基因表达均被有效地抑制,其中重组质粒-2的干扰效率最高,其mRNA及ILK表达显著下调,其抑制率分别为93.01%和65.69%:ILKmRNA表达较阴性对照组、空质粒组表达量显著下降(0.090±0.009vs 1.147±0.110,1.005±0.121,P〈0.01).结论:成功构建ILK基因RNA干扰重组质粒。重组质粒能有效抑制胰腺癌Panc-1细胞ILK基因表达.为进-步研究ILK在胰腺癌中的基因功能奠定基础.
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