【出 处】：

【作 者】： 卢燕军 [1] ; 付陆军 [2] ; 杨家进 [1] ; 曾鹏 [1] ; 蒋为民 [1] ; 吴建兵 [1]

【摘 要】目的：采用RNA干扰技术（RNA interference,RNAi）抑制骨形态发生蛋白7（bone morphogenetic protein 7,BMP7）的表达,观察BMP7基因沉默对人肝癌Hep G_2细胞增殖和迁移的影响.方法：设计并化学合成针对BMP7的3对小干扰RNA（small interfering RNA,si RNA）,使用Trans Lipid？HL Transfection Reagent瞬时转染人肝癌Hep G_2细胞,并设正常对照组、Negative-si RNA组及BMP7-si RNA-1、BMP7-siRNA-2、BMP7-siRN A-3转染组.运用半定量逆转录聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction,RTPCR）和Western blot法分别从m RNA和蛋白水平检测Hep G_2细胞中BMP7的表达变化,选取沉默效果最明显的si RNA片段进行后续实验.采用MTT比色法及Transwell迁移实验分别检测转染后细胞增殖及迁移的变化,Western blot法检测各组细胞凋亡相关蛋白（Bax、Bcl-2、Caspase3）表达情况,流式细胞仪检测转染后细胞周期变化.结果：RT-PCR和Western blot结果显示,BMP7-s i R N A-3转染组B M P 7抑制效果最明显（P〈0.01）,选取BMP7-si RNA-3转染组进行后续实验.MTT比色法显示,转染后48,72 h细胞生长增殖均受到抑制（P〈0.01）.Transwell迁移实验显示,转染24 h后,BMP7-si RNA-3转染组Hep G_2细胞穿膜数均明显低于正常组和Negative-si RNA组（P〈0.01）.Western blot检测发现BMP7-si RNA-3组比对照组的细胞凋亡相关蛋白Bax、Caspase3表达增加（P〈0.01）,Bcl-2表达差异无统计学意义.流式细胞仪检测发现转染后48 h,BMP7-si RNA-3组Hep G_2细胞被阻滞在G_2期（P〈0.01）.结论：si RNA介导BMP7基因沉默对人肝癌H e p G 2细胞的增殖与迁移具有抑制作用,对细胞凋亡有促进作用,并可阻滞细胞在G_2期.