【出 处】：

【作 者】： 肖江强 [1] ; 施晓雷 [2] ; 袁献温 [2] ; 丁义涛 [2]

【摘 要】目的：通过慢病毒转染UE7T-13细胞,构建Tet-on基因开关调控稳定表达肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）、成纤维细胞生长因子-4（fibroblast growth factor 4,FGF4）的人类骨髓间充质干细胞株.方法：全基因合成HGF和FGF4序列,通过酶切、重组分别构建包含目的基因HGF、FGF4的两个慢病毒载体plenti6.3/TO-HGF和plenti6.3/TO-FGF4,包装并计算其滴度.以UE7T-13细胞最适MOI值稀释慢病毒Lenti3.3/T R,并转染UE7T-13细胞,加入抗生素Zeocin筛选,获得带有Tet-on基因调控开关的UE7T-13-TR细胞株.采用已构建好的慢病毒plenti6.3/TO-HGF和plenti6.3/TO-FGF4分别转染UE7T-13-T R细胞并经过抗生素Blasticidin筛选,构建Tet-on调控稳定表达HGF的UE7T-13-TR-HGF细胞株和Tet-on调控稳定表达FGF4的UE7T-13-TR-FGF4细胞株.通过Q-PCR、Western blot及ELISA在基因、蛋白及蛋白分泌水平检测目的基因HGF、FGF4的表达情况.结果：成功构建UE7T-13-TR-HGF和UE7T-13-TR-FGF4细胞株.经Q-PCR检测,当Tet存在时,HGF基因在UE7T-13-TR-HGF中的表达为无Tet时的78倍;FGF4基因则超过2万倍,且1μg/m L的Tet为较佳浓度.Western blot及ELISA结果在蛋白表达水平及蛋白分泌水平验证了以上结果,证明已合成的HGF及FGF4能成功分泌到细胞外.结论：通过慢病毒转染UE7T-13细胞,我们成功构建出Tet可调控稳定表达HGF、FGF4细胞株（UE7T-13-TR-HGF和UE7T-13-TR-FGF4细胞株）,为进一步的研究奠定了良好的实验基础.