Smad4基因敲低对结肠癌阿霉素化疗敏感性的影响
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【摘 要】目的:探讨应用小发卡RNA(small hairpin RNA,shRNA)干扰技术敲低Smad4基因对结肠癌细胞阿霉素(doxorubicin)化疗敏感性的影响.方法:应用shRNA干扰技术敲低人结肠癌H C T116细胞Smad4基因,分空白细胞对照Control组,shRNA阴性对照RNAi-NC组和shRNA干扰RNAi-Smad4组,采用终浓度为50 nmoL/L doxorubicin用7 d,蛋白免疫印迹和逆转录聚合酶链反应鉴定Smad4敲低效果.MTT检测细胞存活率.酶联免疫吸附测定检测转化生长因子β(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)的表达水平.蛋白免疫印迹检测多药耐药基因糖蛋白(multi drugs resistance gene plasma membrane glycoprotein,MDR P-g p),上皮细胞间质细胞样转化相关的标志物E-cadherin.Vimentin和相关的转录因子Snail、Slug、Smad2/3和磷酸化Smad2/3的蛋白表达.结果:Smad4 shRNA能够显著敲低Smad4基因的表达.MTT结果显RNAi-Smad4组较RNAi-N C组的细胞存活率降低,且呈时间依赖性.50 nmoL/L阿霉素作用于癌细胞7 d后,ELISA结果提示阿霉素能显著提高RNAi-Smad4组和RNAi-NC组的TGF-β1的表达(P〈0.05).蛋白免疫印迹提示MDR p-gp、Vimentin、Snail和Slug的表达RNAi-NC组较对照组升高而RNAi-Smad4能抑制这种高表达,E-cadherin蛋白RNAi-NC组较对照组减低而RNAi-Smad组则能升高该蛋白的表达;阿霉素处理后不影响Smad2/3的表达,但提高了RNAi-Smad4组和RNAi-NC组的磷酸化Smad2/3的表达.结论:敲低Smad4基因以阻断TGF-β/Smad4信号通路可提高结肠癌的阿霉素化疗敏感性。
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