SRPX2真核表达载体的构建及其在SW480细胞中的表达
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【摘 要】目的:构建人含sushi重复蛋白X连锁2(sushi repeat-containing protein,X-linked 2,SRPX2)基因真核表达载体pcDNA3.1-SRPX2,并在结肠癌细胞系SW480中瞬时表达.方法:采用逆转录PCR方法从人结直肠癌HCT116细胞总RNA中扩增出SRPX2 CDS区的cDNA片段,先后与T载体pMD19及真核表达载体pcDNA3.1连接,重组质粒经双酶切和测序鉴定无误后,采用Lipofectamine 2000瞬时转染SW480细胞,应用实时荧光定量PCR及免疫印迹法检测SRPX2 mRNA及蛋白的表达水平.结果:成功构建真核表达载体pcDNA3.1-SRPX2,测序和双酶切鉴定结果均正确,载体能在SW480细胞中上调SRPX2 mRNA表达,并正确表达SRPX2蛋白.结论:成功构建SRPX2真核表达载体,为进一步研究SRPX2基因在结直肠癌中的功能奠定了基础。
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