高尔基体磷蛋白3基因过表达对胃癌细胞增殖的影响
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【作 者】:
【摘 要】目的:观察高尔基体磷蛋白3(Golgi phosphoprotein 3,GOLPH3)基因过表达后胃癌细胞增殖的情况.方法:构建GOLPH3基因过表达重组慢病毒颗粒pGC-FU-GOLPH3-EGFP,用慢病毒法感染胃癌细胞株SGC-7901,利用荧光显微镜(Axiovert200)gL察感染后细胞内EGFP表达的情况,利用流式细胞技术检测慢病毒的感染效率,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerasechainreaction)和蛋白质印迹(Western blot)技术分别在基因水平和蛋白水平检测GOLPH3在SGC-7901.GOLPH3组(感染PGC-FU.GOLPH3-EGFP质粒的SGC-79011、SGC-7901-empty-vectored.(感染pGC-FU-EGFP质粒的SGC-7901)和SGC-7901-blank组(未感染慢病毒的SGC-7901)的表达水平:以四唑蓝比色法(MTT)检测GDLPH3基因过表达后胃癌细胞增殖的情况;Westernblot技术检测胃癌细胞SGC.7901稳转细胞株中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTORl和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的表达水平.
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