shRNAmaspin/pGenesil-1.1表达载体的构建及意义
【出 处】:
【作 者】:
【摘 要】目的:构建maspin基因shRNA真核表达载体,为进一步研究脚盘妒扬基因在胃癌细胞株MKN-28生长、浸润、转移中的作用奠定基础.方法:设计合成针对maspin基因的shRNA与表达绿色荧光蛋白的pGenesil-1.1质粒连接,构建的重组质粒分别命名为阳性质粒maspin/pGenesil和阴性质粒YX/pGenesil.分别用RT-PCR和Westernblot检测转染重组质粒前后胃癌细胞株MKN.28maspin的表达变化.结果:通过凝胶电泳和DNA测序分析,成功构建针对maspin特异性shRNA真核表达质粒maspin/pGenesil及YX/pGenesil.RT-PCR与Westernblot检测发现转染成功后maspin/pGenesil组比YX/pGenesil组maspinmRNA的表达显著下降(0.127±0.02VS0.510±0.01,.P〈0.05);maspin/pGenesil组比YX/pGenesil组maspin蛋白表达也显著下降(0.24±0.10V,9O.65±0.09.P〈0.05).结论:成功构建了重组质粒maspin/pGenesil,经转染能有效抑制人胃癌细胞株MKN.28maspin基因的表达.
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