异常凝血酶DCP基因克隆表达、纯化及单克隆抗体制备与鉴定
【出 处】:
【作 者】:
【摘 要】目的:通过克隆、表达一种有前景的肝癌肿瘤标志物人去羟基凝血素(Des-γ-carboxyprothrombin,DCP),制备抗DCP单克隆抗体并初步鉴定其特性.方法:依据DCP基因序列,合成DCP全长基因,构建原核表达载体pColdⅡ—DCP,转化至Escherichia coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,vZZNi^2+孙亲和层析柱纯化带有His标签的DCP蛋白.纯化的蛋白免疫Balb/c小鼠,制备抗DCP单克隆抗体,以ELISA法检测抗体效价与亚型;Westernblot和免疫组织化学染色鉴定抗体特异性.结果:成功表达并获得DCP蛋白,其相对分子量约为23000;获得1株稳定分泌抗人DCP单克隆抗体杂交瘤细胞株385;Western blot和免疫组织化学结果显示抗人DCP单克隆抗体能与DCP发生特异性结合,且ELISA检测抗体的效价为1:2.43×10^5,其亚类为IgG2a.结论:成功制备了抗人DCP单克隆抗体,为进一步将该抗体应用于肝癌的早期诊断提供了重要工具.
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