shRNA沉默MRE11表达对肝癌耐药细胞BEL7402/5-FUDNA损伤修复的影响
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【摘 要】目的: 观察shMRE11沉默MRE11基因对肝癌耐药细胞Bel7402/5-FU DNA损伤修复功能的影响. 方法: 采用阳离子脂质体法将shMRE11干扰质粒转染BEL7402/5-FU细胞, Real-time PCR及Western blot检测沉默效率; Western blot检测细胞γ-H2AX蛋白表达; EdU法检测细胞DNA合成; MTT法检测细胞增殖情况. 结果: Real-time PCR及Western blot检测结果显示MRE11 mRNA及蛋白水平的沉默效率分别为78.0%、56.1%; Western blot检测γ-H2AX表达结果显示shMRE11实验组(1.04±0.056)较对照组(0.847±0.025)增加(P〈0.05, t = 10.78); EdU检测结果显示shMRE11实验组DNA合成率(38.819±2.607)较对照组(49.814±1.227)降低(P〈0.05, t = -8.87); MTT细胞增殖检测结果显示转染72 h后shMRE11实验组(0.58±0.08)与对照组(0.87±0.09)相比细胞增殖速度减慢(P〈0.05, t = -50.2). 结论: shMRE11干扰质粒能够有效抑制BEL7402/5-FU细胞中MRE11表达, 使细胞DNA损伤修复能力减弱、抑制细胞增殖.
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