水通道蛋白3与紧密连接的相关性
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【摘 要】目的:探讨水通道蛋白3(aquaporin 3,AQP3)对肠黏膜上皮细胞间紧密连接(tight junction,TJ)的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:应用Caco-2细胞系在体外构建肠黏膜上皮屏障,构建沉默AQP3的shRNA慢病毒载体,建立稳定转染细胞系.实验分为3组:空白对照组(BLANK)、阴性对照组(NC)、AQP3干扰组(AQP3 shRNA).Western blot验证TJ相关蛋白Occludin以及Claudin-1的表达情况;并且采用免疫细胞化学法观察TJ相关蛋白的分布和结构变化.结果:RT-PCR及Western blot结果显示在Caco-2细胞系中成功沉默AQP3的表达.干扰组与对照组相比下降约75%.Western blot结果显示AQP3干扰组TJ相关蛋白Occludin以及Claudin-1的表达明显降低.免疫细胞化学结果显示Caco-2细胞间Occludin以及Claudin-1主要表达在细胞膜和/或胞浆中,Occludin和Claudin-1细胞间棕褐色颗粒减少,结构变模糊.相邻Caco-2细胞间TJ结构遭到破坏.结论:靶向AQP3的shRNA技术可以引起TJ的结构变化和相关蛋白的表达分布的异常.
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